FAQ

Le choix entre l’Hikarazine™ Z108 et l’Hikarazine™ Z103 dépend du dosage que vous souhaitez réaliser:

• Pour les tests où l’intensité de bioluminescence est primordiale, tels que la microscopie à bioluminescence et l’imagerie des petits animaux, l’Hikarazine™ Z108 est le meilleur choix.
• Pour les tests nécessitant des temps de réaction plus longs, l’Hikarazine™ Z103 est recommandée. Bien qu’il soit légèrement moins lumineux, certains utilisateurs rapportent également un meilleur rapport signal/bruit dans certaines conditions.

Le choix du tampon est crucial pour une bioluminescence optimale. Il est recommandé d’utiliser du PBS, mais d’autres tampons peuvent être utilisés en fonction du test réalisé.
Par exemple, l’ajout de 0,01 % de Tween peut aider avec des matrices complexes, malgré une légère augmentation du bruit de fond.
De plus, la luminosité et la demi-vie de bioluminescence peuvent être modifiées selon les des compositions cationiques. Si vous avez besoin de conseils supplémentaires, veuillez contacter nos experts.

Comme pour le substrat de référence, l’émission de lumière et la luminosité de l’Hikarazine™ sont influencées par plusieurs facteurs :

• La quantité d’oxygène disponible sur le site de la luciférase,
• La composition du tampon, qui peut favoriser la relaxation non radiative du substrat activé,
• La température, qui peut affecter l’activité de la luciférase et la stabilité du complexe enzyme-substrat, modifiant ainsi l’intensité lumineuse,
• La concentration ionique, en particulier les cations divalents, qui peuvent influencer l’efficacité de la réaction de bioluminescence,
• Le pH du milieu, un pH inapproprié pouvant altérer l’activité de la luciférase,
• La présence de cofacteurs ou d’inhibiteurs, certains composés pouvant améliorer l’efficacité de la réaction, tandis que d’autres pouvant la réduire.

Ces facteurs doivent être optimisés pour assurer les meilleures performances du pro-substrat bioluminescent Hikarazine™.

Pour assurer une stabilité jusqu’à deux ans, conservez les flacons à température ambiante, à l’abri de la chaleur, de la lumière et de l’humidité.

Une légère altération de la couleur de la surface de la poudre peut se produire avec le temps. Cependant, cela n’affecte pas son efficacité, à condition que le pro-substrat soit utilisé dans des conditions standard préconisées dans la notice.

La solution mère est acide, ce qui améliore sa stabilité.
Stockée à 4°C, elle reste stable pendant 6 mois.
Elle peut être également stockés à -20°C pour une durée de vie supplémentaire. Il conviendra alors de réaliser des tests régulièrement pour valider sa stabilité.

Le pic d’émission de bioluminescence des luciférines activées Hikarazine™ Z103 et Z108 a été mesuré à 450 ± 3 nm.

Les substrats de l’Hikarazine™ contiennent des atomes de fluor. La présence de ces derniers améliore leur solubilité et leur biodisponibilité pour l’imagerie des petits animaux.
Pour des résultats optimaux, nous recommandons une injection de 100 à 150 µL de Z103 ou de Z108 à une concentration de 1 mM (dose cible de 3 mg/kg pour des souris d’environ 20 g).

Non, contrairement aux systèmes bioluminescents basés sur les lucioles, les systèmes bioluminescents marins, y compris l’Hikarazine™, ne nécessitent pas d’ATP.

Oui, les substrats d’Hikarazine™ sont brevetés sous EP3615516, US11938199 et JP7366752.

On ajoute une matrice génétique (ADN ou ARN) dans un lysat cellulaire actif contenant les éléments nécessaires à la transcription et à la traduction. Si l’on part d’ADN (plasmidique ou linéaire) l’ARN messager est d’abord synthétisé, puis les ribosomes assemblent la chaîne polypeptidique. La réaction se déroule dans un milieu ouvert et contrôlé. Les conditions biochimiques peuvent être ajustées pendant la synthèse.

Le cell-free fournit des résultats rapidement sans construction de lignée ni culture prolongée. Le système ouvert permet d’ajuster directement l’environnement de synthèse et de repliement, et d’ajouter des cofacteurs, des ligands ou d’autres additifs. Il réduit aussi les échecs d’expression liés à la cytotoxicité, à l’instabilité ou à l’agrégation. Il est particulièrement adapté à la caractérisation et à la validation expérimentale précoce.

Tout type de protéines peut être exprimé en cell-free, que ce soit des protéines membranaires grâce à l’ajout de stabilisateurs (lipides ou détergents), des complexes protéiques composés de plusieurs polypeptides qui seront co-traduits ainsi que des protéines toxiques.

Le CFPS est pertinent lorsqu’une protéine est difficile à exprimer ou lorsqu’un résultat rapide est nécessaire. Il est utilisé pour la validation de cibles, les études d’interaction, le marquage, le prototypage ou le screening de variants. Il permet d’obtenir rapidement une protéine testable avant d’envisager une production à plus grande échelle en cell-free ou en système cellulaire.