[et_pb_section fb_built=”1″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” background_color=”#FFFFFF” custom_padding=”||0px||false|false” global_colors_info=”{}”][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#4D1749″ text_font_size=”19px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}” text_text_color__hover_enabled=”off|desktop”]<\/p>\n
Les particules pseudovirales (VLP) sont des nanostructures constitu\u00e9es de prot\u00e9ines virales assembl\u00e9es, d\u00e9pourvues de mat\u00e9riel g\u00e9n\u00e9tique viral et donc non infectieuses. Leur int\u00e9r\u00eat r\u00e9side dans la possibilit\u00e9 de les utiliser pour transporter et d\u00e9livrer des m\u00e9dicaments, des vaccins ou des substances d’imagerie.\u00a0<\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” custom_padding=”||0px||false|false” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n Elles peuvent \u00eatre produites dans divers syst\u00e8mes in vivo, y compris des bact\u00e9ries, des insectes, des plantes et des mammif\u00e8res, ainsi que dans des syst\u00e8mes acellulaires<\/span><\/strong>. En fait, les syst\u00e8mes acellulaires ont d\u00e9j\u00e0 prouv\u00e9 qu’ils pouvaient synth\u00e9tiser des VLP fonctionnelles, en pr\u00e9sentant plusieurs avantages par rapport aux syst\u00e8mes in vivo. [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_image src=”http:\/\/synthelis.com\/wp-content\/uploads\/2023\/10\/VLPS.webp” alt=”Synthelis – Technologie Cell-Free” title_text=”VLPS” align=”center” _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” custom_margin=”|||18px|false|false” custom_padding=”||0px|18px|false|false” box_shadow_style=”preset3″ global_colors_info=”{}”][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n On trouve dans la litt\u00e9rature plusieurs exemples illustrant la production avantageuse de VLP par des syst\u00e8mes acellulaires. La VLP de la prot\u00e9ine d’enveloppe du bact\u00e9riophage MS2<\/strong><\/span> (VLP MS2) et une VLP de la prot\u00e9ine centrale de l’h\u00e9patite B<\/strong><\/span> tronqu\u00e9e en C-terminal (VLP HBV) ont \u00e9t\u00e9 produites dans un syst\u00e8me acellulaire bas\u00e9 sur Escherichia coli, rapportant pour la premi\u00e8re fois l’utilisation d’un syst\u00e8me acellulaire bas\u00e9 sur des procaryotes pour produire des VLP assembl\u00e9es de mani\u00e8re efficace [5]. Les rendements de production et d’assemblage \u00e9taient plus \u00e9lev\u00e9s que les meilleurs rendements publi\u00e9s pr\u00e9c\u00e9demment (l’efficacit\u00e9 d’assemblage pour la VLP MS2 et la VLP HBV produites \u00e0 partir de r\u00e9actions CFPS de 30 \u00b5l et 1 ml \u00e9tait \u2265 80 %, ce qui a donn\u00e9 des rendements de VLP assembl\u00e9es compris entre 356 et 442 \u00b5g\/ml). En outre, le syst\u00e8me acellulaire propos\u00e9 a montr\u00e9 un potentiel de mise \u00e0 l’\u00e9chelle.<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|desktop” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” width=”100%” custom_margin=”||30px||false|false” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n Dans un autre travail, deux prot\u00e9ines de capside de VLP de norovirus humain<\/strong><\/span> (HuNoV) (VP1 du HuNoV de g\u00e9notype GII.3 (VP1-GII.3) et de g\u00e9notype GII.4 (VP1-GII.4)) ont \u00e9t\u00e9 synth\u00e9tis\u00e9es \u00e0 l’aide d’un syst\u00e8me acellulaire bas\u00e9 sur E. coli [6]. Les deux prot\u00e9ines pr\u00e9sentaient la bonne masse mol\u00e9culaire et se sont assembl\u00e9es en VLP de taille et de morphologie pr\u00e9cises. Les rendements obtenus \u00e9taient comparables \u00e0 ceux obtenus \u00e0 l’aide d’un syst\u00e8me cellulaire Pichia pastoris, mais avec l’avantage d’un temps de production de 4 heures<\/strong><\/span>, par rapport au temps de production de >50 heures des syst\u00e8mes cellulaires, en plus d’\u00eatre plus rentables.<\/p>\n Les syst\u00e8mes de synth\u00e8se de prot\u00e9ines acellulaires (CFPS) peuvent \u00e9galement permettre la fonctionnalisation de la surface des VLP<\/span><\/strong>, en utilisant la chimie click catalys\u00e9e par le Cu(I), permettant la conjugaison directe de prot\u00e9ines contenant des azides et des alcynes (y compris un fragment d’anticorps et le facteur de stimulation des colonies de granulocytes et de macrophages), des acides nucl\u00e9iques et des cha\u00eenes de poly\u00e9thyl\u00e8ne glycol \u00e0 la surface de la VLP [7]. La proc\u00e9dure d’attachement direct rapport\u00e9e a permis de conjuguer trois ligands diff\u00e9rents aux VLP<\/strong><\/span> en une seule \u00e9tape et a permis de contr\u00f4ler les rapports relatifs et l’abondance de surface des esp\u00e8ces attach\u00e9es.<\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|desktop” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n Un syst\u00e8me d’expression acellulaire eucaryote a \u00e9t\u00e9 utilis\u00e9 pour produire le virus de l’enc\u00e9phalomyocardite<\/strong><\/span> \u00e0 partir d’un ADN plasmidique ou d’un produit PCR [8]. Le syst\u00e8me utilisait un extrait de cellules HeLa, compl\u00e9t\u00e9 par l’ARN polym\u00e9rase T7, et le virus a \u00e9t\u00e9 produit en 4 heures avec une grande efficacit\u00e9. En outre, le syst\u00e8me ne n\u00e9cessitait ni la synth\u00e8se ni la purification de l’ARN pour produire les particules virales in vitro, ce qui est un avantage pour la production de particules virales. Un syst\u00e8me d’expression acellulaire a \u00e9galement \u00e9t\u00e9 d\u00e9velopp\u00e9 pour la production de poliovirus<\/strong><\/span> [9].<\/p>\n Des syst\u00e8mes acellulaires \u00e0 base de lysat de r\u00e9ticulocytes de lapin ont permis l’expression et l’assemblage de la polyprot\u00e9ine GAG du VIH<\/span><\/strong> [10] et de la capside du virus de l’h\u00e9patite C<\/span><\/strong> [11]. Un syst\u00e8me acellulaire \u00e0 base d\u2019extrait cellulaire de levure s’est \u00e9galement r\u00e9v\u00e9l\u00e9 efficace pour l’expression de la prot\u00e9ine L1 du papillomavirus humain 58<\/strong><\/span> (HPV58) et l’assemblage de VLP \u00e0 partir de la prot\u00e9ine de capside mentionn\u00e9e [12].<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n En conclusion, la technologie CFPS se r\u00e9v\u00e8le \u00eatre une alternative pr\u00e9cieuse et m\u00eame avantageuse aux syst\u00e8mes cellulaires pour la production de VLP. La production acellulaire de VLP peut \u00eatre r\u00e9alis\u00e9e \u00e0 partir d’extraits de diverses sources cellulaires et une large gamme de structures VLP peut \u00eatre synth\u00e9tis\u00e9e efficacement, ce qui d\u00e9montre la grande polyvalence de la CFPS.<\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|phone” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n Avec plus de 13 ans d’exp\u00e9rience dans la technologie acellulaire, l’\u00e9quipe de Synthelis peut vous aider si vous souhaitez tester la production de VLP \u00e0 l’aide d’un syst\u00e8me acellulaire. N’h\u00e9sitez pas \u00e0 nous contacter si vous avez un tel projet.\u00a0<\/span><\/p>\n<\/blockquote>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row column_structure=”1_2,1_2″ _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”1_2″ _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][\/et_pb_column][et_pb_column type=”1_2″ _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][dnxte_button button_text=”Prendre RDV” button_link=”@ET-DC@eyJkeW5hbWljIjp0cnVlLCJjb250ZW50IjoicG9zdF9saW5rX3VybF9wYWdlIiwic2V0dGluZ3MiOnsicG9zdF9pZCI6IjI2NCJ9fQ==@” dnxt_button_alignment=”right” _builder_version=”4.21.0″ _dynamic_attributes=”button_link” _module_preset=”default” btn_fonts_text_color=”#EDE8EC” background_color=”#4D1749″ global_colors_info=”{}”][\/dnxte_button][\/et_pb_column][\/et_pb_row][\/et_pb_section][et_pb_section fb_built=”1″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” background_color=”#FFFFFF” custom_padding=”||0px||false|false” global_colors_info=”{}”][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” min_height=”1777.3px” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_divider color=”#D2C6D2″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][\/et_pb_divider][et_pb_text _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_4_font=”PT Serif|700|||||||” header_4_text_color=”#D2C6D2″ header_4_font_size=”26px” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|phone” header_4_font_size_tablet=”26px” header_4_font_size_phone=”24px” header_4_font_size_last_edited=”on|phone” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” custom_padding=”|||0px||” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [1] Ceres P., Zlotnick A. 2002. Weak protein-protein interactions are sufficient to drive assembly of hepatitis B virus capsids. Biochemistry 41:11525-11531.<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1021\/bi0261645<\/a><\/p>\n [2] Bundy B.C., Swartz J.R. 2011. Efficient disulfide bond formation in virus-like particles. J. Biotechnol. 154:230-239.\u00a0<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1016\/j.jbiotec.2011.04.011<\/a><\/p>\n [3] Kim D., Swartz J.R. 2004. Efficient production of a bioactive, multiple disulfide-bonded protein using modified extracts of Escherichia coli. Biotechnol. Bioeng. 85:122-129.<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1002\/bit.10865<\/a><\/p>\n [4] Stiege W., Erdmann V.A. 1995. The potentials of the in vitro protein biosynthesis system. J. Biotechnol. 41:81-90.\u00a0<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1016\/0168-1656(95)00005-B<\/a><\/p>\n [5] Bundy B.C., Franciszkowicz M.J., Swartz J.R. 2008. Escherichia coli-based cell-free synthesis of virus-like particles. Biotechnol. Bioeng. 100:28-37.<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1002\/bit.21716<\/a><\/p>\n [6] Sheng J., Lei S., Yuan L., Feng X. 2017. Cell-free protein synthesis of norovirus virus-like particles. RSC Adv. 7:28837.<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1039\/c7ra03742b<\/a><\/p>\n [7] Patel K.G., Swartz J.R. 2011. Surface functionalization of virus-like particles by direct conjugation using azide\u2212alkyne click chemistry. Bioconjug. Chem. 22:376-387.<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1021\/bc100367u<\/a><\/p>\n [8] Kobayashi T., Nakamura Y., Mikami S., Masutani M., Machida K., Imataka H. 2012. Synthesis of encephalomyocarditis virus in a cell-free system: from DNA to RNA virus in one tube. Biotechnol. Lett. 34:67-73.<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1007\/s10529-011-0744-z<\/a><\/p>\n [9] Franco D., Pathak H.B., Cameron C.E., Rombaut B., Wimmer E., Paul A.V. 2005. Stimulation of poliovirus synthesis in a HeLa cell-free in vitro translation-RNA replication system by viral protein 3CDpro. J. Virol. 79:6358-6367.<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1128\/JVI.79.10.6358-6367.2005<\/a><\/p>\n [10] Spearman P., Ratner L. 1996. Human immunodeficiency virus type 1 capsid formation in reticulocyte lysates. J. Virol. 70:8187-8194.<\/p>\n [11] Klein K.C., Polyak S.J., Lingappa J.R. 2004. Unique features of hepatitis C virus capsid formation revealed by de novo cell-free assembly. J. Virol. 78:9257-9269.<\/p>\n https:\/\/doi.org\/10.1128\/JVI.78.17.9257-9269.2004<\/a><\/p>\n
Tout d’abord, les syst\u00e8mes acellulaires permettent de traduire simultan\u00e9ment plusieurs ARNm, ce qui facilite la production de complexes actifs comprenant un certain nombre de sous-unit\u00e9s diff\u00e9rentes.
Deuxi\u00e8mement, la technologie acellulaire est particuli\u00e8rement avantageuse lorsque les conditions optimales d’assemblage sont difficiles \u00e0 \u00e9tablir in vivo, notamment lorsque la force ionique, le pH et\/ou le potentiel d’oxydor\u00e9duction ne sont pas physiologiques [1].
Troisi\u00e8mement, la production et la stabilit\u00e9 des VLP d\u00e9pendent de la formation de ponts disulfures, qui peut \u00eatre r\u00e9alis\u00e9e et contr\u00f4l\u00e9e dans des syst\u00e8mes acellulaires en ajustant le potentiel redox de la r\u00e9action [2,3].
Enfin, les syst\u00e8mes acellulaires permettent d’obtenir des rendements plus \u00e9lev\u00e9s lorsque les prot\u00e9ines virales sont cytotoxiques ou insolubles in vivo<\/strong> <\/span>[4].<\/p>\nUn moyen d’acc\u00e9l\u00e9rer et d’optimiser la production de VLP…\u00a0<\/strong><\/h2>\n
\u00c0 partir de diff\u00e9rents syst\u00e8mes acellulaires<\/h2>\n
Synthelis<\/h2>\n
\n
Sources<\/h4>\n