[et_pb_section fb_built=”1″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” background_color=”#FFFFFF” custom_padding=”||0px||false|false” global_colors_info=”{}”][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#4D1749″ text_font_size=”19px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}” text_text_color__hover_enabled=”off|desktop”]<\/p>\n
Les amylo\u00efdes sont des agr\u00e9gats de prot\u00e9ines pr\u00e9sentant une structure fibrillaire non ramifi\u00e9e typique, qui sont impliqu\u00e9s dans plusieurs maladies de mauvais repliement des prot\u00e9ines, associ\u00e9es \u00e0 des maladies neurod\u00e9g\u00e9n\u00e9ratives telles que les maladies d’Alzheimer et de Parkinson, et les maladies \u00e0 prions [1].<\/strong><\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” custom_padding=”||0px||false|false” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n Il existe \u00e9galement des amylo\u00efdes fonctionnels, qui sont des agr\u00e9gats de prot\u00e9ines partageant la m\u00eame structure que les amylo\u00efdes pathologiques, mais qui pr\u00e9sentent des fonctions diff\u00e9rentes qui pr\u00e9sentent certains avantages, telles que la participation \u00e0 des processus de signalisation ou \u00e0 l’immunit\u00e9 inn\u00e9e [2]. L’\u00e9tude de la relation structure-fonction des amylo\u00efdes fonctionnels a \u00e9t\u00e9 principalement r\u00e9alis\u00e9e par r\u00e9sonance magn\u00e9tique nucl\u00e9aire<\/span><\/strong> (RMN) \u00e0 l’\u00e9tat solide, en s’appuyant surtout sur la d\u00e9tection des noyaux 13C et 15N, mais aussi sur des techniques plus r\u00e9centes, \u00e0 savoir la rotation rapide \u00e0 angle magique (MAS) et la d\u00e9tection du 1H. Afin d’am\u00e9liorer leur sensibilit\u00e9, ces m\u00e9thodes n\u00e9cessitent l’enrichissement de l’\u00e9chantillon avec des isotopes actifs<\/strong><\/span> en RMN.<\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|desktop” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n En raison de la nature hydrophobe des prot\u00e9ines et des peptides amylo\u00efdog\u00e8nes et de leur forte propension \u00e0 s’agr\u00e9ger, il est difficile de les synth\u00e9tiser dans des syst\u00e8mes cellulaires<\/strong><\/span>, car ils sont souvent d\u00e9pos\u00e9s sous forme de corps d’inclusion. Par cons\u00e9quent, leur production n\u00e9cessite des \u00e9tapes suppl\u00e9mentaires de d\u00e9naturation chimique avant la purification, et d’autres \u00e9tapes de repliement pour isoler la prot\u00e9ine active. Elles peuvent \u00e9galement \u00eatre cytotoxiques, ce qui entra\u00eene de faibles rendements de production. <\/span>En outre, la pr\u00e9paration des \u00e9chantillons comprend une \u00e9tape finale d’agr\u00e9gation des prot\u00e9ines in vitro<\/em>, qui peut entra\u00eener un polymorphisme structurel et des lignes RMN \u00e9tendues. En revanche, la synth\u00e8se acellulaire de ces agr\u00e9gats de prot\u00e9ines surpasse les probl\u00e8mes rencontr\u00e9s par la production cellulaire<\/span><\/strong>. La proc\u00e9dure est plus s\u00fbre et il est facile d’incorporer des acides amin\u00e9s naturels et non naturels qui peuvent \u00eatre marqu\u00e9s isotopiquement.<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|desktop” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” width=”100%” custom_margin=”||30px||false|false” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n La production cell-free de fibrilles amylo\u00efdes pour l’analyse par RMN MAS a \u00e9t\u00e9 r\u00e9cemment rapport\u00e9e [3]. L’approche utilise la possibilit\u00e9 conf\u00e9r\u00e9e par les syst\u00e8mes cell-free d’incorporer des isotopes actifs en RMN \u00e0 des positions sp\u00e9cifiques. Dans ce travail, le prion amylo\u00efde fonctionnel HET-s (218-289), un domaine formant le prion du champignon filamenteux Podospora anserina, a \u00e9t\u00e9 produit. La synth\u00e8se a \u00e9t\u00e9 r\u00e9alis\u00e9e par une m\u00e9thode de dialyse, \u00e0 30 \u00b0C pendant 18 h, avec un extrait d’E. coli S30 (figure 1a).<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_image src=”http:\/\/synthelis.com\/wp-content\/uploads\/2023\/07\/cellfree-synthesis-of-amyloid-proteins.png” alt=”Synthelis – Technologie Cell-Free” title_text=”cellfree synthesis of amyloid proteins” _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” custom_margin=”|||18px|false|false” custom_padding=”||0px|18px|false|false” box_shadow_style=”preset3″ global_colors_info=”{}”][\/et_pb_image][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||on||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”15px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n Figure 1 – Synth\u00e8se acellulaire du domaine formant le prion de l’HET-s [3] : a – repr\u00e9sentation sch\u00e9matique de la synth\u00e8se CF (FM – m\u00e9lange d’alimentation, RM – m\u00e9lange r\u00e9actionnel) ; b – le RM est r\u00e9colt\u00e9 par centrifugation et lav\u00e9 pour obtenir l’\u00e9chantillon RMN ; c – micrographie \u00e9lectronique des fibrilles amylo\u00efdes HET-s synth\u00e9tis\u00e9es par CF (barre d’\u00e9chelle = 100 nm) ; d – les fibrilles amylo\u00efdes HET-s synth\u00e9tis\u00e9es par CF d\u00e9clenchent la conversion ph\u00e9notypique des souches [Het-s*] (infection) d\u00e9tect\u00e9e comme une r\u00e9action de mort cellulaire r\u00e9gul\u00e9e observ\u00e9e par la r\u00e9action de barrage (fl\u00e8che jaune) lorsque la souche focale au centre de la plaque est confront\u00e9e aux quatre souches [Het-S] \u00e0 la p\u00e9riph\u00e9rie. Reproduit avec l’autorisation de l’auteur.<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n Cette proc\u00e9dure a permis d’isoler la prot\u00e9ine agr\u00e9g\u00e9e sous une forme pure<\/span><\/strong>. Les monom\u00e8res de HET-s se sont spontan\u00e9ment auto-assembl\u00e9s dans le m\u00e9lange r\u00e9actionnel et ont pr\u00e9sent\u00e9 une morphologie fibrillaire, comparable \u00e0 celle obtenue par les proc\u00e9dures standard<\/strong> <\/span>(figure 1c). En outre, les fibrilles amylo\u00efdes HET-s synth\u00e9tis\u00e9es par CF ont effectivement induit la formation du prion [Het-s] in vivo<\/em> chez P. anserina (figure 1d), pr\u00e9sentant le m\u00eame comportement infectieux que les fibrilles assembl\u00e9es in vitro \u00e0 partir du domaine de formation du prion HET-s purifi\u00e9.<\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|desktop” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n L’expression de la prot\u00e9ine gr\u00e2ce \u00e0 la technologue cell-free \u00e9tait d\u00e9j\u00e0 visible apr\u00e8s 6 heures<\/strong><\/span>, montrant un processus de traduction rapide de la prot\u00e9ine, et le rendement de la r\u00e9action \u00e9tait d’environ 1 mg\/ml<\/span><\/strong>, ce qui est comparable \u00e0 la synth\u00e8se cell-free de prot\u00e9ines membranaires int\u00e9grales \u00e0 partir d’extraits d’E. coli S30. Cette quantit\u00e9 de culot \u00e9tait suffisante pour \u00eatre utilis\u00e9e dans des rotors RMN \u00e0 l’\u00e9tat solide de petite taille.<\/p>\n Afin d’effectuer une analyse RMN MAS, des isotopes 13C et 15N adapt\u00e9s et des \u00e9tiquettes fluor\u00e9es ont \u00e9t\u00e9 incorpor\u00e9s dans le m\u00e9lange r\u00e9actionnel. Les r\u00e9sultats de la RMN ont montr\u00e9 que la conformation locale des r\u00e9sidus des agr\u00e9gats de HET-s synth\u00e9tis\u00e9s par CF \u00e9tait comparable \u00e0 la conformation de la forme infectieuse de r\u00e9f\u00e9rence des fibrilles amylo\u00efdes de HET-s<\/span><\/strong>, et qu’un tr\u00e8s faible polymorphisme structurel a \u00e9t\u00e9 observ\u00e9 au niveau des r\u00e9sidus.<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|desktop” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.27.4″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” hover_enabled=”0″ global_colors_info=”{}” sticky_enabled=”0″]<\/p>\n L’ensemble de ces r\u00e9sultats sugg\u00e8re que le processus de pliage et d’assemblage des monom\u00e8res HET-s dans le m\u00e9lange r\u00e9actionnel CF a permis de former des agr\u00e9gats fibrillaires ayant la m\u00eame conformation que l’amylo\u00efde infectieuse obtenue \u00e0 partir de la proc\u00e9dure de recombinaison.<\/strong><\/span> La d\u00e9tection du 1H et l’analyse par RMN MAS 19F ont \u00e9t\u00e9 effectu\u00e9es sur les fibrilles amylo\u00efdes produites par CF, ce qui prouve que le produit cell-free peut \u00eatre caract\u00e9ris\u00e9 par les techniques mentionn\u00e9es, \u00e0 des niveaux inf\u00e9rieurs au milligramme<\/strong><\/span>. En outre, l’approche cell-free s’est r\u00e9v\u00e9l\u00e9e tr\u00e8s rentable pour l’introduction d’acides amin\u00e9s fluor\u00e9s,<\/span><\/strong> par rapport \u00e0 la surexpression bact\u00e9rienne standard, \u00e9tant donn\u00e9 que de plus petites quantit\u00e9s d’acides amin\u00e9s fluor\u00e9s ont \u00e9t\u00e9 utilis\u00e9es.<\/p>\n R\u00e9dig\u00e9 par Lu\u00edsa Silva, PhD et experte scientifique.<\/em><\/p>\n <\/p>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_text _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|phone” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n La synth\u00e8se cellulaire des prot\u00e9ines est une m\u00e9thode efficace et pratique pour le marquage isotopique des prot\u00e9ines. Elle offre de toutes nouvelles possibilit\u00e9s pour les m\u00e9thodes de RMN. Si, comme beaucoup, vous \u00eates \u00e0 la recherche d’un syst\u00e8me d’expression plus \u00e9conomique, la synth\u00e8se acellulaire est la voie \u00e0 suivre. Chez Synthelis, nous disposons de l’expertise n\u00e9cessaire pour vous aider \u00e0 produire efficacement des prot\u00e9ines marqu\u00e9es par isotopes pour vos exp\u00e9riences de RMN en utilisant le milieu cellulaire. Contactez-nous !<\/span><\/p>\n<\/blockquote>\n [\/et_pb_text][\/et_pb_column][\/et_pb_row][et_pb_row column_structure=”1_2,1_2″ _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”1_2″ _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][\/et_pb_column][et_pb_column type=”1_2″ _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][dnxte_button button_text=”Prendre RDV” button_link=”@ET-DC@eyJkeW5hbWljIjp0cnVlLCJjb250ZW50IjoicG9zdF9saW5rX3VybF9wYWdlIiwic2V0dGluZ3MiOnsicG9zdF9pZCI6IjI2NCJ9fQ==@” dnxt_button_alignment=”right” _builder_version=”4.21.0″ _dynamic_attributes=”button_link” _module_preset=”default” btn_fonts_text_color=”#EDE8EC” background_color=”#4D1749″ global_colors_info=”{}”][\/dnxte_button][\/et_pb_column][\/et_pb_row][\/et_pb_section][et_pb_section fb_built=”1″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” background_color=”#FFFFFF” custom_padding=”||0px||false|false” global_colors_info=”{}”][et_pb_row _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” width=”100%” global_colors_info=”{}”][et_pb_column type=”4_4″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][et_pb_divider color=”#D2C6D2″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” global_colors_info=”{}”][\/et_pb_divider][et_pb_text _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” header_2_font=”PT Serif|700|||||||” header_4_font=”PT Serif|700|||||||” header_4_text_color=”#D2C6D2″ header_4_font_size=”26px” header_2_font_size_tablet=”” header_2_font_size_phone=”24px” header_2_font_size_last_edited=”on|phone” header_4_font_size_tablet=”26px” header_4_font_size_phone=”24px” header_4_font_size_last_edited=”on|phone” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [\/et_pb_text][et_pb_text _builder_version=”4.21.0″ _module_preset=”default” text_font=”PT Serif||||||||” text_text_color=”#000000″ text_font_size=”17px” text_line_height=”1.8em” custom_padding=”|||0px||” global_colors_info=”{}”]<\/p>\n [1] Chiti F., Dobson C.M. 2017. Protein misfolding, amyloid formation, and human disease: a summary of progress over the last decade. Annu. Rev. Biochem. 86:27-68.\u00a0 [2] Cai X., Chen J., Xu H., Liu S., Jiang Q.-X., Halfmann R., Chen Z.J. 2014. Prion-like polymerization underlies signal transduction in antiviral immune defense and inflammasome activation. Cell 156:1207-1222. [3] Lends A., Daskalov A., Maleckis A., Delamare A., Berbon M., Gr\u00e9lard A., Morvan E., Shenoy J., Dutour A., Tolchard J., Noubhani A., Giraud M.-F., Sanchez C., Habenstein B., Guichard G., Compain G., Jaudzems K., Saupe S.J., Loquet A. 2022. Cell-free synthesis of amyloid fibrils with infectious properties and amenable to sub-milligram magic-angle spinning NMR analysis. Commun. Biol. 5:1202. [\/et_pb_text][et_pb_divider color=”#D2C6D2″ _builder_version=”4.16″ _module_preset=”default” custom_margin=”60px||||false|false” global_colors_info=”{}”][\/et_pb_divider][\/et_pb_column][\/et_pb_row][\/et_pb_section]<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" Cell-free synthesis is a very advantageous solution to produce amyloid proteins. Discover CF assets in this article. <\/p>\n","protected":false},"author":5,"featured_media":3385,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_et_pb_use_builder":"on","_et_pb_old_content":"","_et_gb_content_width":"","_surecart_dashboard_logo_width":"180px","_surecart_dashboard_show_logo":true,"_surecart_dashboard_navigation_orders":true,"_surecart_dashboard_navigation_invoices":true,"_surecart_dashboard_navigation_subscriptions":true,"_surecart_dashboard_navigation_downloads":true,"_surecart_dashboard_navigation_billing":true,"_surecart_dashboard_navigation_account":true,"footnotes":""},"categories":[32,34],"tags":[],"post_folder":[],"class_list":["post-3398","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-cell-free-en","category-proteins"],"yoast_head":"\nSynth\u00e8se acellulaire : un moyen plus s\u00fbr de produire des fibrilles amylo\u00efdes\u00a0<\/strong><\/h2>\n
Synth\u00e8se acellulaire : un moyen de produire des prions purs et fonctionnels\u00a0<\/strong><\/h2>\n
Synth\u00e8se acellulaire : un moyen rapide et efficace de produire des prot\u00e9ines<\/strong><\/h2>\n
Synth\u00e8se acellulaire : un moyen rentable de produire des prot\u00e9ines<\/strong><\/h2>\n
Synthelis<\/h2>\n
\n
Sources<\/h4>\n