Caractérisation
de protéines.

Ci-après l’ensemble des méthodes que nous utilisons soit de manière standard (SDS-PAGE et Western Blotting), soit en option :

Pour garantir la qualité des protéines que nous avons synthétisées pour vous ou que vous avez produites, nous vous proposons nos services d’analyses qualitatives. Ces analyses nous permettent notamment de déterminer le niveau de pureté de la protéine d’intérêt, de valider son identité et d’étudier l’homogénéité de la solution obtenue.

Certaines analyses telles que le contrôle par SDS-Page et l’analyse par Western-blot sont incluses dans nos offres de production de protéines afin de s’assurer de la pureté et de l’identité du produit obtenu.

SDS-PAGE (conditions réductrice et non-réductrice) – Pureté

Western blotting – Identité et intégrité

Spectrométrie de masse – Poids moléculaire exact et séquence

Size Exclusion Chromatographie (SEC) – Etat oligomérique et pureté

Thermal Shift Assay (TSA) – Stabilité de la protéine

LAL – Dosage des endotoxines

Étude de stérilité – Contamination

RP- & SE-HPLC – Identité et pureté

nanoDSF – Stabilité et repliement

Afin de caractériser au mieux les protéines produites dans nos systèmes, acellulaire ou cellulaire, nous proposons différentes méthodes de quantification pour répondre à vos besoins spécifiques.
Ainsi nous incluons de façon standard un dosage UV afin de déterminer la concentration de la protéine obtenue en solution, ou pour les protéines produites en protéoliposomes, une quantification sur gel SDS-PAGE. 

SDS-PAGE  – Quantité spécifique

Dosage UV – Quantité totale de protéines

Dosage colorimétrique – Quantité totale de protéines

Dosage d’acides aminés – Quantité totale

Les interactions entre protéines sont à la base de la majorité des processus cellulaires et sont indispensables à un grand nombre de fonctions dans le monde du vivant. Ces interactions sont notamment impliquées dans la transduction de signaux, la formation de complexes protéiques, le transport de protéines, l’activation ou l’inhibition de voies métaboliques…
Nous vous proposons d’étudier les interactions de votre protéine d’intérêt avec son ligand. Il existe de nombreuses méthodes d’investigation des interactions protéine-protéine. Chaque méthode ayant ses avantages et inconvénients. Nous vous proposons une grande variété de techniques : SPR, BLI, ITC, FRET ou MST notamment afin de pouvoir choisir la plus adaptée à votre projet. 

ELISA

Microscale thermophoresis (MST) – Spécificité et affinité

BLI – Spécificité et affinité

SPR – Spécificité, Kd, Kon, Koff

PEAQ-ITC – Stoechiométrie de liaison (n), constante d’affinité (KD), et variations d’enthalpie (ΔH) et d’entropie (ΔS)

Nous pouvons vérifier l’activité de vos protéines grâce à des tests d’activité enzymatique, des tests électrophysiologiques sur Orbit Mini (Nanion) et nous pouvons également en fonction de vos besoins développer et réaliser des tests d’activités à façon.

Patch-clamp – Activité de canal

Activité enzymatique – Fonctionnalité

Tests à façon – Fonctionnalité

Liaison de radio-ligand(s) – Activité spécifique

Enfin, nous pouvons vous proposer plusieurs analyses structurales, allant de l’évaluation des structures secondaires par Dichroïsme Circulaire (CD) ou Spectroscopie Infrarouge à Transformée de Fourier (FTIR), à la résolution de structure tridimensionnelle par cryo-microscopie électronique (Cryo-EM), spectroscopie par résonance magnétique nucléaire (NMR) ou par cristallographie et diffraction aux rayons X.

Dichroïsme Circulaire – % structures secondaires

Spectroscopie Infrarouge à Transformée de Fourier (FT-IR) – % structures secondaires

Microscopie à Force Atomique (AFM) – Orientation de la protéine et validation des domaines transmembranaires

Cryo-EM – Structure tridimensionnelle

Diffraction aux rayons X – Structure tridimensionnelle

RMN